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高效液相色谱仪常用的三种测定方法介绍
点击次数:319 发布时间:2022-12-06
    高效液相色谱仪(HPLC)是应用高效液相色谱原理,主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中做相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。
  高效液相色谱仪分析中常用的定性方法有利用已知标准样品定性、利用检测器的选择性定性和利用紫外检测器全波长扫描功能定性等。
  一、利用已知标准样品定性:
  利用标准样品对未知化合物定性是常用的高效液相色谱定性方法。
  由于每一种化合物在特定的色谱条件下(流动相组成、色谱柱和柱温等相同),其保留值具有特征性,因此,可以利用保留值进行定性。如果在相同的色谱条件下,被测化合物与标准样品的保留值一致,可以初步认为被测化合物与标准样品相同。若流动相组成经多次改变后,被测化合物的保留值仍与标准样品的保留值一致,就能进一步证实被测化合物与标准样品为同一化合物。
  二、利用检测器的选择性定性:
  同一种检测器对不同种类的化合物的响应值是不同的,而不同的检测器对同一种化合物的响应也是不同的。所以当某一被测化合物同被两种或两种以上检测器检测时,两检测器或几个检测器对被测化合物检测灵敏度比值与被测化合物的性质是密切相关的,可以用来对被测化合物进行定性。这是双检测器定性的基本原理。
  双检测器体系的联接有串联联接和并联联接方式。当两种检测器中的一种是非破坏型的,可以采用简单的串联联接方式,方法是将非破坏型检测器串接在破坏型检测器之前。若两种检测器都是破坏型的,需采用并联方式联接,方法是在色谱柱的出口端连接一个三通,分别联接到两个检测器上。在高效液相色谱中常用于定性分析的双检测体系是紫外检测器(UVD)和荧光检测器(FLD)。
  三、利用紫外检测器全波长扫描功能定性:
  紫外检测器是高效液相色谱中使用广泛的一种检测器。全波长扫描紫外检测器可以根据被检测化合物的紫外光谱图提供一些有价值的定性信息。传统的方法是在色谱图上某组分的色谱峰出现极大值,即浓度最大时,通过停泵等手段,使组分在检测池中滞留,然后对检测池中的组分进行全波长扫描,得到该组分的紫外可见光谱图,再取可能的标准样品按同样方法处理。对比两者光谱图即能鉴别出该组分与标准样品是否相同。某些有特殊紫外光谱图的化合物也可以通过对照标准谱图来识别。
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